Esta tecnología está basada en la detección de RNA objetivo por medio de la hibridación con oligonucleótidos modificados y su afinidad con anticuerpos acoplados a horse radish peroxidase (HRP). La intención es detectar los niveles de una proteína objetivo a través del RNA templado.
Se inmoviliza un oligonucleótido de captura (rojo) usando pirrol y polimerizándolo a poli-pirrol por medio de voltamperometrías, esto se puede hacer teniendo el primer, una solución de pirrol y un electrodo de oro. Para hacer este procedimiento se usa un POTENSIOSTATO
Después se incuban el templado inmovilizado con el oligonucleótido de detección (azul) y el RNA objetivo
El oligonucleótido de detección tiene una molécula de fluoresceína pegada al extremo 3’, si el apareamiento es correcto la fluoresceína puede ser detectada por un anticuerpo específico para fluoresceína que está acoplado a HRP
De esta manera tu sistema de detección acoplado está listo y sólo es cuestión de ajustar un potencial en el potensiostato (aplicar un voltaje o potencial). La molécula usada es 3,39,5,59-tetramethylbenzidine (TMB en su estado reducido con H2O2) aplicando en el potensiostato un potencial de -200 mV se generan curvas de detección en función de la reducción de TMB por cronoamperometrías, esta respuesta puede ser calibrada para obtener una línea de calibración corriente vs concentración RNA objetivo.
Las superficies del sensor están funcionalizadas para unirse específicamente a la molécula diana
Se añade la muestra y se produce una unión específica en el sensor funcionalizado
La unión no específica es arrastrada
Se añade la enzima reportera de HRP, que se une a otro sitio en la molécula diana
El exceso de enzima se elimina
Se aplica un potencial de polarización, que genera una corriente proporcional a la concentración de analito